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네펜데스는 자연 상태에서 영양염이 낮은 환경에 적응해 있어 고염류 배지보다 묽은 MS나 저염류 배지에서 반응이 더 좋은 경우가 많습니다.
시험관묘는 고습 환경에 적응해 있어 바로 외부로 내보내면 수분 손실과 광 스트레스로 쉽게 고사합니다. 점진적 순화가 핵심입니다.
유리화는 과도한 수분, 낮은 겔 강도, 환기 부족, 높은 사이토키닌 농도 등으로 발생합니다. 조직이 투명하고 물러지는 특징이 있습니다.
간이 멸균은 가능하지만 조직배양 수준의 안정적인 무균 상태를 만들기는 어렵습니다. 오토클레이브 사용이 가장 안전합니다.
2,4-D는 강한 캘러스 유도에 자주 사용되고, NAA는 발근이나 일부 조직의 유도에 폭넓게 쓰입니다. 반응성은 식물마다 다릅니다.
보석란은 갈변이 심할 수 있어 L-ascorbic acid, citric acid 전처리, 활성탄 첨가, 빠른 계대배양 등이 도움이 됩니다.
대부분의 식물 조직배양에서는 pH 5.6에서 5.8 사이를 많이 사용합니다. 식물 종류에 따라 약간 조정할 수 있습니다.
정식 조직배양에서는 클린벤치가 매우 중요합니다. 무균 공기 흐름을 유지해 세균과 곰팡이 오염을 크게 줄여줍니다.
발근이 잘 안 되는 이유로는 옥신 부족, 배지 염류 농도 과다, 신초의 미성숙, 광 조건 부적합 등이 있습니다. IBA나 NAA 조절이 중요합니다.
캘러스 유도에는 보통 2,4-D, NAA 같은 옥신 계열 호르몬이 핵심입니다. 식물종에 따라 농도와 조합을 조절해야 합니다.
MS 배지는 무기염과 비타민 조성이 비교적 풍부하고 다양한 식물에 적용 사례가 많아 기본 배지로 가장 널리 사용됩니다.
가장 큰 원인은 불완전한 표면 소독과 작업 중 무균 조작 실패입니다. explant 자체 오염, 작업대 소독 부족, 공기 중 미생물 유입도 주요 원인입니다.
소독 시간을 감으로 정하거나 기록 없이 여러 조건을 한 번에 바꾸는 것이 가장 흔한 실수입니다. 한 번에 한 변수만 바꾸는 것이 좋습니다.
틸란드시아는 갈변, 느린 반응, 오염 문제, 재분화 어려움이 겹치는 경우가 많아 다른 식물보다 난이도가 높은 편입니다.
바닐라는 오염 관리, 건강한 절편 선택, 적절한 증식 배지, 그리고 계대배양 타이밍이 중요합니다. 줄기 상태에 따라 반응 차이가 큽니다.
결로가 많으면 배양체 표면이 과습해지고 오염 확산과 유리화 가능성이 높아질 수 있습니다. 온도 편차와 환기를 점검해야 합니다.
배지 조성, 호르몬 농도, 날짜, 오염률, 생장 반응을 기록해야 성공 조건을 재현하고 실패 원인도 분석할 수 있습니다.
일반적으로 3주에서 8주 사이가 많지만 식물과 배지 조건에 따라 다릅니다. 너무 늦으면 갈변과 노화가 증가할 수 있습니다.
PPM은 초기 오염 위험이 높거나 내생오염이 의심될 때 시험적으로 사용할 수 있습니다. 다만 과량 사용 시 생장 저해가 있을 수 있습니다.
활성탄은 갈변 유도 물질이나 독성 대사산물을 흡착해 배양체 상태를 안정시키는 데 도움을 줄 수 있습니다. 발근 단계에서 자주 사용됩니다.